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多聚磷酸對GFP相態(tài)轉變的影響

信息來源:www.0710house.com | 發(fā)布時間:2020年11月04日

多聚磷酸對GFP相態(tài)轉變的影響,首 先,分別觀測了LB培養(yǎng)基中表達了GFP的細菌與SMW培養(yǎng)基(低養(yǎng)分培養(yǎng)基)中細菌表達的GFP的狀態(tài)。多聚磷酸廠家,多聚磷酸價格。實驗結果顯示,LB培養(yǎng)基中的細菌GFP均勻分散在菌體中,而SMW培養(yǎng)基中的細菌蛋白發(fā)生了明顯的相分離,蛋白分別聚集于菌體的兩端。由于兩種培養(yǎng)基中細菌內多聚磷酸含量具有差異,因此設想這種相分離的發(fā)生與細菌內部的多聚磷酸有關。

接下來,利用陽離子染料DAPI對細菌內部的多聚磷酸進行染色,發(fā)現在發(fā)生相分離的細菌體中,GFP的綠色熒光點與多聚磷酸包裹的DAPI形成的黃色點發(fā)生重合,這則初步證實了多聚磷酸與蛋白的相互作用誘發(fā)了這種相分離行為。
動態(tài)過程顯示,綠色熒光蛋白在濃度逐漸增高的多聚磷酸的作用下逐漸發(fā)生聚集,最后在30分鐘時在細菌的兩端形成蛋白微液滴結構。進一步的實驗中,通過逐漸調節(jié)培養(yǎng)基中的養(yǎng)分濃度來控制細菌內的多聚磷酸含量,結果在60分鐘時,GFP依舊發(fā)生了聚集。而反過來,逐漸提高培養(yǎng)基中的養(yǎng)分,原本聚集的GFP又分散開來。以上現象充分證明了多聚磷酸對GFP的相分離起到了重要作用。

多聚磷酸含量對蛋白聚集的影響
隨后,在菌體外進行了液-液相分離機理的研究。首 先,發(fā)現未加入多聚磷酸的GFP溶液始終是澄清的,而加入了多聚磷酸的GFP溶液隨時間推移發(fā)生渾濁,顯微鏡下可以明顯觀測到在該溶液中存在蛋白小液滴。以此現象為基礎,通過調節(jié)多聚磷酸的鏈長以及陰陽離子的比例(R-/+)來對多聚磷酸與蛋白的相互作用機理進行評估。實驗結果顯示,多聚磷酸的存在對蛋白的相分離有明顯的促進作用;并且隨著多聚磷酸鏈長的增加,蛋白相分離的驅動力變大,越容易發(fā)生蛋白的液-液相分離;與此同時,電荷比對相分離現象也有明顯的影響,R-/+越大,形成的液滴越大,即越容易發(fā)生相分離。
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